1.
フォーリン-チオカルト法=Folin-Ciocalteuポリフェノール量(Total polyphenolic content; TPC)を分析する方法です．
フェノール試薬1)2)，炭酸ナトリウム3)4)を使用します．
久保らは、フェノール試薬は、タングステン酸、モリブデン酸、リン酸、塩酸等から調製されており、フェノール性水酸基との反応によりホスホタングステン酸・ホスホモリブデン酸に還元され、波長750nm付近に吸収を生じると述べている.5)
緑茶や紅茶の総ポリフェノール量の分析方法は，ISO 14502-1:2005で標準化されています（国際標準；公定法の１つ）6)7)．標準物質は，没食子酸一水和物8)である．標準化により、企業間での規格の標準化争いが起きないため、品質向上やコスト削減に力を入れることができます9)。
ISO 14502-1:2005，http://www.iso.o…
チョコレートのポリフェノールの分析にも使われています．
Reza Mahdaviらは2010年にDetermination and Comparison of Total Polyphenol and Vitamin C Contents of Natural Fresh and Commercial Fruit Juicesについてと述べており、ジュースの総ポリフェノール量とビタミンC量について述べている。10)
藤田らは、2013年にFolin-Chiocalteu colorimetric analysis using a scanner for rapid determination of total polyphenol content in many test samplesについて報告し、スキャナーによる低コストで分析できると述べている11)。
Milan S. Staらは2011年にTOTAL PHENOLIC CONTENT, FLAVONOID CONCENTRATIONS AND ANTIOXIDANT ACTIVITY, OF THE WHOLE PLANT AND PLANT PARTS EXTRACTS FROM TEUCRIUM MONTANUM L.VAR. MONTANUM, F. SUPINUM (L.) REICHENB.についてフォーリン-チオカルト法；と述べており、フェノール試薬の体積百分率は、10パーセントに希釈したものを使用したと述べている12)。
抽出溶媒として，アルコールを使う場合，炭酸ナトリウムがアルコールに難溶性なので，白濁することがあります13)．
【文献】
・Jacek Obuchoらは2011年にFlavanol database for green and black teas utilising ISO 14502-1 and ISO 14502-2 as analytical toolsというタイトルで報告し，ISO14502-1(フォーリン-チオカルト法とISO14502-2(HPLC法;液クロ)で求めた総ポリフェノール量の関係を示していると述べている14)。
・CLAUDIA ANESらは2008年にTotal Polyphenol Content and Antioxidant Capacity of Commercially Available Tea (Camellia sinensis) in ArgentinaについてCLAUDIAらは，フェノール試薬（フォーリン-チオカルト試薬）は，10%(v/v)を，炭酸ナトリウムは，7.5%(w/v)を使用したと述べている15)。
・液中投入型吸光度センサ素子及びそれを用いた吸光光度計16)
【グラフ】
フォーリンチオカルト法の紫外可視吸収スペクトル（参考）17)
マイクロプレートリーダーを使用した没食子酸の終濃度と吸光度の関係18)
クロロゲン酸溶液の濃度とLog10(R0/R)の関係19)
投げ込み式吸光光度計を使ったクロロゲン酸溶液の濃度とLog10(I0/I)の関係20)
xNのフェノール試薬(500uL)+0.075 mg/mLクロロゲン酸水溶液(500μL)+10%炭酸ナトリウム水溶液(500uL)21)
スキャナによるクロロゲン酸の濃度とLog10(XYZ0/XYZ)の関係22)
マイクロプレートリーダーを使ったときのクロロゲン酸の終濃度 vs 吸光度23)
マイクロプレートリーダーを使用したカテコールの終濃度と吸光度の関係24)
マイクロプレートリーダーを使用したミリセチンの終濃度と吸光度の関係25)
マイクロプレートリーダーを使用したルチンの終濃度と吸光度の関係26)
【関連分析】
タンニンの分析は，酒石酸鉄法がある．
【卒論】
大～子は、2013年に、それまでの研究をフォーリン・チオカルト法とデジタル画像処理を用いた総ポリフェノール量の比色分析というテーマで卒業論文としてまとめ、山形大学を卒業した27)。
くうきは、2014年に、それまでの研究をFolin-Ciocalteu法による食品中の総ポリフェノール含量決定のための多検体迅速分析というテーマで修士論文としてまとめ、山形大学を卒業した28)。
フォーリンチオカルト法の紫外可視吸収スペクトル（参考）, グラフ.
マイクロプレートリーダーを使用した没食子酸の終濃度と吸光度の関係, グラフ.
クロロゲン酸溶液の濃度とLog10(R0/R)の関係, グラフ.
投げ込み式吸光光度計を使ったクロロゲン酸溶液の濃度とLog10(I0/I)の関係, グラフ.
xNのフェノール試薬(500uL)+0.075 mg/mLクロロゲン酸水溶液(500μL)+10%炭酸ナトリウム水溶液(500uL), グラフ.
スキャナによるクロロゲン酸の濃度とLog10(XYZ0/XYZ), グラフ.
マイクロプレートリーダーを使ったときのクロロゲン酸の終濃度 vs 吸光度 , グラフ.
マイクロプレートリーダーを使用したカテコールの終濃度と吸光度の関係, グラフ.
マイクロプレートリーダーを使用したミリセチンの終濃度と吸光度の関係, グラフ.
マイクロプレートリーダーを使用したルチンの終濃度と吸光度の関係, グラフ.
(1) フェノー > フェノール試薬
フェノール試薬, Phenol Reagent, (材料).
(2) フェノー > 10%(v/v)フェノール試薬
10%(v/v)フェノール試薬, , (材料).
(3) @ > 炭酸ナトリウム
炭酸ナトリウム, Sodium carbonate , (材料).
(4) @ > 炭酸ナト > 7.5%(w/v)炭酸ナトリウム水溶液
7.5%(w/v)炭酸ナトリウム水溶液, , (材料).
(5) ポリフェノール含有量を低減させたサラシア抽出物
久保 利昭,本間 俊之, 特許,0,0(2011).
(6) ISO 14502-1 Determination of substances characteristic of green and black tea -- Part 1: Content of total polyphenols in tea -- Colorimetric method using Folin-Ciocalteu reagent
International Organization for Standardization, International Organization for Standardization, (2005).
(7) > 緑茶と紅茶の総ポリフェノール量の決定（ISOの公定法）
International Organization for Standardization, ISO 14502-1 Determination of substances characteristic of green and black tea -- Part 1: Content of total polyphenols in tea -- Colorimetric method using Folin-Ciocalteu reagent, International Organization for Standardization, , (2005).
(8) @ > 没食子酸－水和物
没食子酸－水和物, , (材料).
(9) 品質管理 > ISOは世界共通のルール
松林光男、渡辺弘, イラスト図解 工場のしくみ, 日本実業出版社, 150, (2004).
(10) Determination
Reza Mahdavi, Zeinab Nikniaz, Maryam Rafraf and Abolghasem Jouyban, pakistan journal of nutrition,9,968(2010).
(11) Folin-Chiocalteu colorimetric analysis using a scanner for rapid determination of total polyphenol content in many test samples
Naoki Fujita, Yu Saito, Yuta Nitto, Tomohiro Ito, Hitoshi Mizuguchi, Masatoshi Endo, and Tateaki Ogata, Studies in Science and Technology, (2013).
(12) TOTAL
Milan S. Stankovic, Neda Niciforovic, Marina Topuzovic, Slavica Solujic, biotechnol. & biotechnol. eq.,0,2227(2011).
(13) 炭酸ナトリウムの溶解度は18.1（＠20℃）, 材料物性.
(14) Flavanol
Jacek Obuchowicza, Ulrich H. Engelhardtb, Katie Donnellyc, journal of food composition and analysis,24,411(2011).
(15) Total
CLAUDIA ANESINI, GRACIELA E. FERRARO, AND ROSANA FILIP, j. agri. food chem.,56,9225(2008).
(16) 液中投入型吸光度センサ素子及びそれを用いた吸光光度計
中原光一, 尾形健明, 伊藤智博, ＷＯ２００８／１０５１４６, (2008).
(17) フォーリンチオカルト法の紫外可視吸収スペクトル（参考）, グラフ.
(18) マイクロプレートリーダーを使用した没食子酸の終濃度と吸光度の関係, グラフ.
(19) クロロゲン酸溶液の濃度とLog10(R0/R)の関係, グラフ.
(20) 投げ込み式吸光光度計を使ったクロロゲン酸溶液の濃度とLog10(I0/I)の関係, グラフ.
(21) xNのフェノール試薬(500uL)+0.075 mg/mLクロロゲン酸水溶液(500μL)+10%炭酸ナトリウム水溶液(500uL), グラフ.
(22) スキャナによるクロロゲン酸の濃度とLog10(XYZ0/XYZ), グラフ.
(23) マイクロプレートリーダーを使ったときのクロロゲン酸の終濃度 vs 吸光度 , グラフ.
(24) マイクロプレートリーダーを使用したカテコールの終濃度と吸光度の関係, グラフ.
(25) マイクロプレートリーダーを使用したミリセチンの終濃度と吸光度の関係, グラフ.
(26) マイクロプレートリーダーを使用したルチンの終濃度と吸光度の関係, グラフ.
(27) フォーリン・チオカルト法とデジタル画像処理を用いた総ポリフェノール量の比色分析
大木 乃梨子, 山形大学 物質化学工学科, 卒業論文 (2013).
(28) Folin-Ciocalteu法による食品中の総ポリフェノール含量決定のための多検体迅速分析
日塔 優太, 山形大学 物質化学工学科, 修士論文 (2014).
フェノール試薬, Phenol Reagent, (材料).
(2) フェノー > 10%(v/v)フェノール試薬
10%(v/v)フェノール試薬, , (材料).
(3) @ > 炭酸ナトリウム
炭酸ナトリウム, Sodium carbonate , (材料).
(4) @ > 炭酸ナト > 7.5%(w/v)炭酸ナトリウム水溶液
7.5%(w/v)炭酸ナトリウム水溶液, , (材料).
(5) ポリフェノール含有量を低減させたサラシア抽出物
久保 利昭,本間 俊之, 特許,0,0(2011).
(6) ISO 14502-1 Determination of substances characteristic of green and black tea -- Part 1: Content of total polyphenols in tea -- Colorimetric method using Folin-Ciocalteu reagent
International Organization for Standardization, International Organization for Standardization, (2005).
(7) > 緑茶と紅茶の総ポリフェノール量の決定（ISOの公定法）
International Organization for Standardization, ISO 14502-1 Determination of substances characteristic of green and black tea -- Part 1: Content of total polyphenols in tea -- Colorimetric method using Folin-Ciocalteu reagent, International Organization for Standardization, , (2005).
(8) @ > 没食子酸－水和物
没食子酸－水和物, , (材料).
(9) 品質管理 > ISOは世界共通のルール
松林光男、渡辺弘, イラスト図解 工場のしくみ, 日本実業出版社, 150, (2004).
(10) Determination
Reza Mahdavi, Zeinab Nikniaz, Maryam Rafraf and Abolghasem Jouyban, pakistan journal of nutrition,9,968(2010).
(11) Folin-Chiocalteu colorimetric analysis using a scanner for rapid determination of total polyphenol content in many test samples
Naoki Fujita, Yu Saito, Yuta Nitto, Tomohiro Ito, Hitoshi Mizuguchi, Masatoshi Endo, and Tateaki Ogata, Studies in Science and Technology, (2013).
(12) TOTAL
Milan S. Stankovic, Neda Niciforovic, Marina Topuzovic, Slavica Solujic, biotechnol. & biotechnol. eq.,0,2227(2011).
(13) 炭酸ナトリウムの溶解度は18.1（＠20℃）, 材料物性.
(14) Flavanol
Jacek Obuchowicza, Ulrich H. Engelhardtb, Katie Donnellyc, journal of food composition and analysis,24,411(2011).
(15) Total
CLAUDIA ANESINI, GRACIELA E. FERRARO, AND ROSANA FILIP, j. agri. food chem.,56,9225(2008).
(16) 液中投入型吸光度センサ素子及びそれを用いた吸光光度計
中原光一, 尾形健明, 伊藤智博, ＷＯ２００８／１０５１４６, (2008).
(17) フォーリンチオカルト法の紫外可視吸収スペクトル（参考）, グラフ.
(18) マイクロプレートリーダーを使用した没食子酸の終濃度と吸光度の関係, グラフ.
(19) クロロゲン酸溶液の濃度とLog10(R0/R)の関係, グラフ.
(20) 投げ込み式吸光光度計を使ったクロロゲン酸溶液の濃度とLog10(I0/I)の関係, グラフ.
(21) xNのフェノール試薬(500uL)+0.075 mg/mLクロロゲン酸水溶液(500μL)+10%炭酸ナトリウム水溶液(500uL), グラフ.
(22) スキャナによるクロロゲン酸の濃度とLog10(XYZ0/XYZ), グラフ.
(23) マイクロプレートリーダーを使ったときのクロロゲン酸の終濃度 vs 吸光度 , グラフ.
(24) マイクロプレートリーダーを使用したカテコールの終濃度と吸光度の関係, グラフ.
(25) マイクロプレートリーダーを使用したミリセチンの終濃度と吸光度の関係, グラフ.
(26) マイクロプレートリーダーを使用したルチンの終濃度と吸光度の関係, グラフ.
(27) フォーリン・チオカルト法とデジタル画像処理を用いた総ポリフェノール量の比色分析
大木 乃梨子, 山形大学 物質化学工学科, 卒業論文 (2013).
(28) Folin-Ciocalteu法による食品中の総ポリフェノール含量決定のための多検体迅速分析
日塔 優太, 山形大学 物質化学工学科, 修士論文 (2014).
2.
豊田らは，スキャン面-溶液-白色シート構成によって，スキャナーによる総ポリフェノール量の分析法の感度および定量性を向上した1)．高瀬らは，フォーリン・チオカルト法に使用してクロロゲン酸の検量線を得るときに，イメージスキャナを使用して画像より算出することを試みた．得られた画像のRGBのRの輝度値をもとに，Log10(R0/R)をとり，相関係数r=0.9961程度の直線関係がの検量線を得れている2)3)．
遠藤らは、アスコルビン酸（ビタミンC）は、フォーリン・チオカルト法に対して影響を与えるが、アスコルビン酸オキシダーゼ(ASOD)によって、軽減できる。しかし、影響を0にすることはできず、吸光度への影響は、アスコルビン酸の濃度に比例することがわかった。すわち、ASODを添加したときと添加しないときの差より、アスコルビン酸の濃度を算出できる．また，フェノール試薬の濃度が低いほうが，吸光度が大きくなる傾向があることを示唆している4) ．
ポリフェノールの分析の研究に使用されています5)6)．
(1) スキャナによる多検体同時比色分析法の検討（仮）
豊田 樹朗, 山形大学 物質化学工学科, 卒業論文 (2010).
(2) スキャナを用いる多検体同時比色分析法の研究 ―総ポリフェノール量の定量―
高瀬 雄大, 山形大学 工学部 物質化学工学科, 卒業論文 (2012).
(3) クロロゲン酸溶液の濃度とLog10(R0/R)の関係, グラフ.
(4) ESR法によるヒメウコギの抗酸化能評価の研究
遠藤芳寛, 山形大学 物質化学工学科, 修士論文 (2007).
(5) うこぎ＆ポリフェノール（仮）
加賀 いづみ, 山形大学 物質化学工学科, 卒業論文 (2013).
(6) スキャナーを用いる ポリフェノールの多検体同時分析（仮）
大木 乃梨子, 山形大学 物質化学工学科, 卒業論文 (2013).
豊田 樹朗, 山形大学 物質化学工学科, 卒業論文 (2010).
(2) スキャナを用いる多検体同時比色分析法の研究 ―総ポリフェノール量の定量―
高瀬 雄大, 山形大学 工学部 物質化学工学科, 卒業論文 (2012).
(3) クロロゲン酸溶液の濃度とLog10(R0/R)の関係, グラフ.
(4) ESR法によるヒメウコギの抗酸化能評価の研究
遠藤芳寛, 山形大学 物質化学工学科, 修士論文 (2007).
(5) うこぎ＆ポリフェノール（仮）
加賀 いづみ, 山形大学 物質化学工学科, 卒業論文 (2013).
(6) スキャナーを用いる ポリフェノールの多検体同時分析（仮）
大木 乃梨子, 山形大学 物質化学工学科, 卒業論文 (2013).